Bramborový dextrózový agar (PDA) je dobré univerzální polotuhé médium používané pro kultivaci hub. Často se používá k izolaci, růstu a údržbě hubotvorných druhů. Lze připravit hotové Petriho misky nebo zkumavky obsahující PDA nebo PDA lze rychle vyrobit pomocí komerční premixu. Není však těžké vyrobit jednoduchou a účinnou verzi od nuly za nízkou cenu.
kredit: Zedcor zcela vlastní / PhotoObjects.net / Getty ImagesPříprava bramborového extraktu
Krok 1
Vložte brambory do hrnce s přibližně 1,2 litru vody z kohoutku a vařte na sporáku po dobu 1 hodiny.
Krok 2
Odstraňte pánev z tepla a nechte tekutinu vychladnout, dokud se s ní nebude pohodlně manipulovat (asi 10 minut).
Krok 3
Kapalný bramborový extrakt nalijte přes sítko nebo tenká a sbírejte jej do jiné nádoby.
Příprava média
Krok 1
Přidá se dextróza a agar do 1 litru vody z bramborového extraktu.
Krok 2
Zkoušejte pH roztoku pomocí papírku na testování pH nebo pH metru.
Krok 3
Pokud je pH vyšší než 6,5, upravte jej přidáním jedné kapky roztoku kyseliny chlorovodíkové najednou a opakovaným testováním.
Krok 4
Pokud je pH pod 6, upravte jej přidáním jedné kapky roztoku hydroxidu sodného najednou a opakovaným testováním.
Sterilizace
Krok 1
Médium důkladně promíchejte a rozdělte do menších šarží po 250 ml nalitých do čtyř 500ml baněk (Poznámka: každá baňka nesmí být více než polovina plná, aby nedošlo k převaření).
Krok 2
Každou baňku zakryjte kouskem volně zalisované hliníkové fólie, aby fólie nespadla, ale neudělala těsné utěsnění.
Krok 3
Vložte baňky do tlakového hrnce.
Krok 4
Provozujte tlakový vařič podle pokynů výrobce a sterilizujte PDA při 121 ° C (250 ° F) při tlaku 103 421 Pascal (15 PSI) po dobu 15 minut.
Krok 5
Vypněte tlakový vařič a nechte jej vrátit se na atmosférický tlak, poté vyjměte baňky a nechte je vychladnout, dokud s nimi nebude možné manipulovat.
Lití média
Krok 1
Vyrovnejte sterilní Petriho misky na rovný povrch.
Krok 2
Jakmile se baňky ochladily na manipulační teplotu, ale než médium začalo tuhnout, jednou rukou uchopte baňku a druhou rukou sejměte a odložte fóliové víko.
Krok 3
U každé Petriho misky zvedněte víko jednou rukou, rychle napůl naplňte tekutým PDA a víko nasaďte zpět.
Krok 4
Opakujte výše uvedený krok 3, dokud nejsou všechna Petriho misky naplněna.
Krok 5
Pokud zbývá nějaký PDA, baňku volně uvolněte s jejím původním fóliovým víčkem, nechte ji vychladnout a ztuhnout, utáhněte fóliové víko a uložte do chladničky.
